而抗生素的檢測可以通過內(nèi)酰胺酶檢測來進行，具體有以下兩種方法：

 

　　1技術創新、間接法

 

　　方法原理：利用β-內(nèi)酰胺酶能夠酶解青霉素的原理效高性，向牛奶中添加一定量的青霉素，如果牛奶中存在一定濃度的β-內(nèi)酰胺酶技術發展，那么青霉素經(jīng)β-內(nèi)酰胺酶酶解后濃度會減少重要的作用，從而判斷牛奶中是否存在β-內(nèi)酰胺酶。

 

　　實驗步驟：稱取20 g試樣可靠，在4℃、16000rpm條件下離心10 min。取下層清液10 g于50 mL塑料離心管我有所應，并將塑料離心管置于37℃水浴鍋中振蕩孵育30 min深刻認識。向孵育后的離心管中加入無水乙醇15 mL。振蕩提取30 min后離心管理，將上層清液過濾紙后收集于梨形瓶中新型儲能。減壓濃縮蒸發(fā)掉乙醇。向旋蒸后的梨形瓶中加入10 mL磷酸鹽緩沖液（pH=8.5）應用提升，渦旋1 min后調(diào)節(jié)pH為8.5不同需求。以1 mL/min的速度將提取液通過經(jīng)過預(yù)處理的Oasis HLB固相萃取柱，用2 mL磷酸緩沖液（pH=8.5）淋洗萃取柱新品技，再用2 mL水淋洗發展空間。然后用3 mL乙腈洗脫。將洗脫液在40℃下氮氣吹干保持穩定，用0.025 M磷酸鹽緩沖液（pH=7.0）定容殘渣至1 mL,待上機測定就此掀開。

 

　　色譜條件：LabAlliance PC-2000高效液相色譜配500型紫外檢測器；

 

　　lanbo色譜柱:C18(4.6mm×150mm×5μm)；

 

　　流動相:甲醇/0.004M磷酸二氫鉀（pH=4.5）＝40/60總之；

 

　　檢測波長:268 nm

 

　　2、直接法

 

　　方法原理：牛乳中的青霉素鉀在β-內(nèi)酰胺酶的作用下好宣講，主要生成青霉噻唑酸鉀連日來，并伴隨生成少量的青霉胺保障性、青霉醛等物質(zhì)不斷進步。經(jīng)去脂肪、蛋白等前處理后領先水平，可以將青霉噻唑酸鉀提取出來認為，經(jīng)高效液相色譜儀檢測確認其是否存在，從而判定該牛乳是否為人造“無抗奶”效率。

 

　　實驗步驟：稱取20 g試樣良好，在4℃雙重提升、16000 rpm條件下離心10 min。取下層清液10 g于50 mL塑料離心管倍增效應，加入無水乙醇15 mL結果，振蕩提取30 min后離心，取清液經(jīng)0.45μm的濾膜過濾重要工具，用高效液相色譜儀檢測將進一步。

 

　　標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：稱取0.01 g（精確至0.001 g）青霉素鉀于100 ml容量瓶中，加入1ml市售抗生素分解劑提供有力支撐，室溫放置2h使青霉素鉀酶解*后用去離子水定容實際需求，得到青霉噻唑酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度100μg/mL發展成就。根據(jù)實際情況稀釋后使用性能。